細胞同步化試劑盒

Cell Syncornization Kit 

【產品介紹】 

 細胞同步化培養技術是利用藥物終止DNA合成，使細胞周期停止在S期。在細胞培養過程中加入 Solution-A ，抑制大部分細胞分裂滯留在S期，經過 16 - 18 小時后，再額外添加Solution-B，就能使細胞集體跨越Solution-A造成的停滯，從而同步進入細胞分裂期，達到細胞周期同步化的目的。隨后再經過低滲、固定及染色處理后，細胞中可見明顯的染色體條帶，可在顯微鏡下觀察并評估染色體是否異常。 高分辨率分析法是常用的一種細胞核型分析操作過程，能產生大量處于有絲分裂前期至中后期狀態的細胞，此時細胞中的姐妹染色體凝聚度較松散且形態較長，經過G顯帶處理后，能看到比一般正常實驗方法處理的細胞更明顯的G顯帶條紋，因此高分辨率分析法能得到更詳細的細胞核型分析結果。 

 試劑盒內含有的試劑: 

 1. Solution-A，氨甲蝶呤（MTX）： 10^-5 M，1.5 mL /管，4管。 

 2. Solution-B，胸苷（Thymidine）： 10^-3 M，1.5 mL /管，4管。 

 【使用方法】 

 以外周血淋巴細胞核型分析為例 

 1. 用肝素預處理全血樣品后，取0.5 mL 全血加入 至含5 mL外周血細胞培養基中。 

 2. 培養48小時后，小心搖晃樣品管并同時加入50 uL 試劑盒10^-5 M Solution-A（最終濃度為：10^-7 M）。 

 3. 加入Solution-A 培養大約 17 小時后，輕微震蕩 混勻樣品管并同時加入50 uL Solution-B（最終濃 度為：10^-5 M）， 再次混勻。 

 4. 接著再培養5- 5.5小時后，加入適量體積的秋 水酰胺溶液（VivaCell貨號：C3541），以終濃 度為準（推薦終濃度為0.1ug/ml），孵育30-50 min。

     秋水酰胺作用時間會影響染色體長度，時間越長，染色體越短。 

 5. 將培養物轉移到離心管中，并以500 xg離心5 min。 

 6. 去除上清液并在離心管中重新懸浮細胞，加入 5-10 ml 提前預溫到37°C的0.075 M氯化鉀低 滲溶液（VivaCell貨號：C3540），在37°C下培 養30 min。 

 7. 以500 xg離心5 min。 

 8. 去除上清液，攪動細胞沉淀物，并逐滴加入5 -10 ml 由乙酸：甲醇=1:3組成的新鮮冰冷固定 劑。在4℃下放置10分鐘。 

 9. 重復步驟7和8。 

10. 將細胞沉淀重新懸浮在少量0.5-1 ml新鮮固定 劑中，滴在干凈的載玻片上，讓其風干。 

11. 在這個階段，用吉姆薩（VivaCell貨號： C3720）染色處理后做染色體核型分析。 

 【儲存條件及保質期】 

 本試劑盒應在- 10°C~ - 20°C 儲存，請避光保存，并在產品有效期內使用。 有效期為18個月。藍冰運輸。 

 【注意事項】 

 氨甲蝶呤可能對生殖功能或胎兒造成不良影響，可能引起眼睛、皮膚和呼吸道的刺激，可能引起血液異常和導 致遺傳性疾病。請避免直接接觸，使用過程做好防護措施， 如與皮膚或黏膜接觸， 請用大量自來水沖洗并視情況就醫冶療。 

僅用于科研使用，不能用于臨床診斷。