瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒（離心柱法）

產(chǎn)品介紹 

本試劑盒適用于從TAE或TBE瓊脂糖凝膠上回收DNA片段，同時(shí)除去蛋白質(zhì)、其他有機(jī)化合物、無機(jī)鹽離子及寡核苷酸引物等雜質(zhì)。采用特殊的 吸附膜和獨(dú)特的緩沖液系統(tǒng)，選擇性的吸附核酸分子，可回收100bp-30kb大小的片段，回收率可達(dá)80%以上。使用本試劑盒回收的DNA可適用 于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、測(cè)序、連接、轉(zhuǎn)化、文庫篩選和體外翻譯等實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng) 

1 使用前檢查各組分是否出現(xiàn)沉淀。若有，請(qǐng)輕輕搖晃混合均勻，或37℃水浴重新溶解。 

2 實(shí)驗(yàn)前使用平衡液處理吸附柱，可以充分激活硅膠膜，提高得率。平衡液處理過的柱子，最好當(dāng)天使用，放置時(shí)間過長(zhǎng)會(huì)影響效果。

3 電泳時(shí)應(yīng)使用新的電泳緩沖液，以免影響電泳和回收效果。 

4 如下一步實(shí)驗(yàn)要求較高，則應(yīng)盡量使用TAE電泳緩沖液。 

5 切膠時(shí)，紫外照射時(shí)間應(yīng)盡量短，以免對(duì)DNA造成損傷。 2.6 如果回收率低，可在膠充分溶解后檢測(cè)pH值，如pH值大于7.5，可向含有DNA的膠溶液中加10-30μl 3M醋酸鈉（pH5.2）將pH值調(diào)到 5-7之間。

使用流程

柱平衡步驟

向吸附柱 AP30中（吸附柱放入收集管中）加入500μl平衡液，12,000rpm（~13,400×g）離心1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回 收集管中。（請(qǐng)使用當(dāng)天處理過的柱子）。

提取步驟

1 將單一的目的DNA條帶從瓊脂糖凝膠中切下（盡量切除多余部分）放入干凈的離心管中，稱取重量。 

2 向膠塊中加入3倍體積的溶膠液（如果凝膠重為0.1g，其體積可視為100μl，則加入300μl溶膠液），50℃水浴放置，其間不斷溫和上下 翻轉(zhuǎn)離心管，以確保膠塊充分溶解。如果還有未溶的膠塊，可繼續(xù)放置幾分鐘或再補(bǔ)加一些溶膠液。

注意：為了提高結(jié)合效率，膠塊完全溶解 后將溶液溫度降至室溫再上柱。 

3 將上一步所得溶液用移液器轉(zhuǎn)移到吸附柱AP30中（吸附柱放入收集管中），室溫放置2min。12,000rpm（~13,400×g）離心1min，倒 掉收集管中的廢液，將吸附柱AP30放入收集管中。 

4 向吸附柱AP30中加入500μl洗滌液 II （請(qǐng)先檢查是否加入無水乙醇），12,000rpm（~13,400×g）離心1min，倒掉收集管中的廢液，將 吸附柱AP30放入收集管中。 

5 重復(fù)操作步驟4。

6 將吸附柱AP30放入收集管中，12,000rpm（~13，400×g）離心2min，目的是將吸附柱中殘余的洗滌液 II去除。將吸附柱AP30置于室溫放 置數(shù)分鐘，徹底晾干，以防止洗滌液 II中殘留的乙醇影響下一步實(shí)驗(yàn)。

7 將吸附柱AP30置于一個(gè)干凈的離心管中，向吸附柱膜的中間部位滴加50-100 μl洗脫液，室溫放置2min，12,000rpm（~13,400×g）離心 1min，將DNA溶液收集到離心管中，如不立即進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)，于-20℃保存?zhèn)溆谩?/span>