磁珠法總RNA提取試劑盒（單條孔）

產品介紹 

磁珠法總RNA提取試劑盒，為客戶提供一套從動物組織、植物組織、培養細胞、細菌中純化完整、高質量總RNA。試劑盒采用獨特的緩沖液系統， 快速裂解細胞，沉淀蛋白，再經過醇介導將核酸分子結合于納米磁珠表面，再經DNA酶I處理去除基因組DNA，最終得到純度高，完整性好的總 RNA。可用于RT-PCR、Real-Time PCR、芯片分析、Northern雜交等多種下游實驗。

注意事項 

1 使用前檢查各組分是否出現沉淀。若有，請輕輕搖晃混合均勻，或37℃水浴重新溶解。

2 β-巰基乙醇請4℃保存，使用前在RNA裂解液中加入400μl的β-巰基乙醇至終濃度為4%，加入β-巰基乙醇的RNA裂解液于4℃保存，有效期 6個月。 

3 戴一次性干凈手套和口罩操作，防止皮膚、唾液和實驗室用品上存在的RNase污染。 

4 使用無菌無RNase的塑料制品和槍頭。 

5 若使用玻璃器皿須經過0.1% DEPC水在37℃下浸泡12小時，然后經過 121℃高壓滅菌30分鐘，烘干后使用。

6 配制相關的試劑必須使用經過121℃高壓滅菌的0.1% DEPC水。

使用流程

樣本預處理 

1 組織樣品 取10-20mg動物組織，置于液氮中快速研磨成粉末，立即加入200μl RNA裂解液（已加入β-巰基乙醇），也可將組織置于離心管中，迅速加入 200μl RNA裂解液（已加入β-巰基乙醇），用普通玻璃勻漿器或者電動勻漿器將組織徹底研磨均勻。

2 細胞樣品 收集2-5×106個細胞。 對于貼壁細胞，吸棄培養液，加入200μl RNA裂解液（已加入β-巰基乙醇）。用移液器反復吹打混勻直至細胞團消化不見為止，轉移到干凈的 離心管內。 對于懸浮細胞：5000rpm（~3056×g）離心5min，吸棄培養液，收集細胞，每2-5×106個細胞加入200μl RNA裂解液（已加入β-巰基乙醇）。 用槍頭反復吹打混勻直至看不到細胞團為止。

3 植物組織樣品 將液氮研磨好的粉末立即轉移到RNA裂解液中，按照每10-20mg加入200μl RNA裂解液（已加入β-巰基乙醇），用移液器吹打均勻至無明顯的粉末團。

4 細菌樣品 用100μl新鮮配制的含溶菌酶的TE緩沖液重懸細菌沉淀。革蘭氏陽性細菌可使用3mg/ml(終濃度)的溶菌酶，輕輕混勻，室溫孵育 5-10min，加入200μl RNA裂解液（已加入β-巰基乙醇），用槍頭吹打混勻；革蘭氏陰性細菌則采用0.4mg/ml(終濃度)的溶菌酶，輕輕敲打 混勻，室溫孵育3-5min。加入200μl RNA裂解液（已加入β-巰基乙醇），用槍頭吹打混勻。

自動化法提取 -MagET? Smart 8

1 向3.1處理好的樣品勻漿液中加入400μl RNA中和液，混勻。室溫放置3-5min。如果動物組織樣品來源比較珍貴，可以選擇裂解物加入 RNA中和液后，置于70℃加熱5min，提高RNA得率。 

2 室溫，12,000rpm（~13,400×g）離心1min，小心吸取上清液備用。

3 按如下比例配制DNase I反應混合液，并輕輕混勻。

4 取出MagET? 總RNA預分裝試劑條 ，顛倒混勻數次使磁珠重懸，輕甩MagET? 總RNA預分裝試劑條使試劑及磁珠集中到試劑條底部。 

注：使用前小心撕去鋁箔封口膜，避免MagET? 總RNA預分裝試劑條劇烈振動，防止液體濺出。

5 將50μl的 DNase I反應混合液加入到MagET? 總RNA預分裝試劑條的第3孔內。

6 在MagET? 總RNA預分裝試劑條的第2孔中加入步驟2的全部上清液，將MagET? 總RNA預分裝試劑條置于MagET? Smart 8 的試劑盒支架上。

7 用移液器準確吸取100μl無核酸酶水，加入到MagET? 洗脫管中，將MagET? 洗脫管安裝于MagET? Smart 8 的試劑盒支架上，將試劑盒支架安裝于MagET? Smart 8 設備底座上。

注：請在加樣后1 h內上機運行程序。

8 將MagET? 4孔磁棒套插入MagET? Smart 8 的磁棒套架卡槽內。

9 選擇程序并運行，自動化程序結束后，取下MagET? 4孔磁棒套丟棄，拿出試劑盒支架，取下MagET? 洗脫管，蓋上管蓋，即得總RNA產物。如不能及時進行下游試驗，RNA樣本可短期保存于-80℃。

表1. MagET? Smart 8 程序設定