GUS染色試劑盒（組織化學法）

GUS Histochemical Stain Kit

產品簡介：

GUS，英文名β-glucuronidase，中文名β-葡（萄）糖苷酸酶，一種功能非常全面的報告基因檢測系統，廣泛用于植物分子生物學和微生物學研究。GUS基因融合系統，根據底物的類型，對細胞/組織或蛋白提取液的GUS酶活性進行定性或定量分析。組織化學方法（定性研究）用于GUS融合蛋白表達的亞細胞定位，多以X-Gluc為底物，因其能被水解生成一無色的葡萄糖醛酸和一肉眼可見的氯-溴靛藍（chloro-bromoindigo）深藍色沉淀。熒光分析法（定量研究）則用于GUS融合蛋白表達水平的研究，常以MUG為底物，因其能被水解生成一無色的葡萄糖醛酸和一熒光產物4-MU（4-甲基傘型酮），藍色熒光（Ex= 365nm，Em= 445nm）。

由于絕大多數植物細胞內不存在內源性的GUS活性，因此，GUS廣泛用作轉基因植物的報告基因，特別是外源基因瞬時表達的轉化實驗。

本試劑盒以X-Gluc為顯色底物，用于GUS融合蛋白的組織化學染色（定性研究）。另，該試劑盒含染色所需的所有試劑，只需將X-Gluc溶液和GUS染色緩沖液按比例混合即可制備成GUS染色工作液。該試劑盒可制備50ml染色工作液。具有操作簡單、快速，穩定，且低背景的優點。

保存條件: 

4℃保存（一年有效）

產品組成：

產品使用：（僅供參考）

1、配制X-Gluc溶液(50×)：

于實驗前提前將X-Gluc（組分A）、GUS Buffer（組分C）置于室溫回溫至少20min；取1mLX-Gluc Solution 完全加至1支X-Gluc 管中，低速漩渦至粉末完全溶解，即獲得X-Gluc溶液(50×)。配制好的X-Gluc溶液(50×)于-20℃避光保存，1個月有效。

【注意】：正常X-Gluc（50×）溶液呈無色，若溶液變為紅色或棕色，說明其失效。

2、按照以下比例，混合制備GUS染色工作液。

【注意】：該染色液最好現用現配，短期貯存可以4℃保存3天。

3、取材：將根莖、葉片、花瓣等組織剪成小片，放到1.5ml離心管。

【注意】：染色用植物材料的制備方法根據特定組織和器官類型而有差異。對于擬南芥的根/花/葉片，以及煙草幼苗的根，可以不做任何預處理直接進行染色；但是，對于煙草和馬鈴薯的莖和葉片需要先剪切成薄片（~1-3mm）再進行染色。而，更大的組織樣品，需用真空滲透法來促進染色工作液滲入細胞。

4、染色：加入適量體積現配好的染色工作液，以完全覆蓋材料為準。鋁箔紙包好，室溫孵育3h-過夜。同時設置陰性和陽性對照實驗。

5、脫色：將染色好的材料轉入70%酒精中脫色2-3次，直至陰性對照材料變為白色。GUS染色陽性的藍色斑點非常穩定，不會被酒精脫色。

6、觀察：大部分GUS染色陽性的藍色斑點肉眼能觀察到，然而，有些材料可能藍色斑點很細微，需要顯微鏡下才能觀察到。【注意】：白色背景上的藍色斑點即為GUS表達位點。

注意事項：

1.      GUS染色液最好冰上配制，現配現用。配制后用不完可-20℃避光保存，如果溶液由無色變為紅色或紫紅色應棄用。

2.      由于組織特異性等原因，藍色顏色反應可能不完全一致，應注意摸索具體實驗條件。

3.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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