Polyplus siRNA/miRNA轉(zhuǎn)染試劑INTERFERin?(101000028)

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INTERFERin?已經(jīng)在1nM siRNA下提供了非常高的沉默效率，并且可以用于多種粘附細(xì)胞和懸浮細(xì)胞。使用低濃度的siRNA可以避免脫靶效應(yīng)，其溫和的作用模式確保了更可靠的數(shù)據(jù)和優(yōu)異的細(xì)胞活力。由于其與血清和抗生素的兼容性，INTERFERin?易于使用，也非常適合轉(zhuǎn)染miRNA和其他寡核苷酸，如pre-miRNA, mimic miRNA, antimiR….

一、更少的siRNA，更少的脫靶效應(yīng)

一些出版物表明，轉(zhuǎn)染低濃度的siRNA可以避免脫靶效應(yīng)。事實(shí)上，當(dāng)以高濃度轉(zhuǎn)染siRNA時(shí)，可以觀察到這些不想要的非特異性副作用（1，2）。因此，可以通過使用盡可能少的siRNA來提高實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性。這就是為什么INTERFERin?被專門設(shè)計(jì)為使用低siRNA濃度提供高沉默效率的原因。

INTERFERin?介導(dǎo)的1nM特異性siRNA的遞送顯示出對基因表達(dá)的選擇性和高效敲低，而競爭對手（L2K）需要至少10nM的siRNA才能達(dá)到50%的沉默效率（圖1）。

圖1:INTERFERin?只需要1 nM的siRNA即可實(shí)現(xiàn)有效的基因沉默。根據(jù)制造商的建議，使用INTERFERin?或競爭對手L2K用抗-Luc siRNA轉(zhuǎn)染穩(wěn)定表達(dá)螢火蟲螢光素酶的3LL細(xì)胞。48小時(shí)后使用常規(guī)測定法測量螢光素酶的表達(dá)。對照siRNA未觀察到抑制作用。

令人驚訝的是，在10pM的siRNA下仍然實(shí)現(xiàn)了50%的沉默（圖2）。

圖2:INTERFERin?即使在極低的siRNA濃度下也是高效的。A549-GL3Luc細(xì)胞在血清存在下使用INTERFERin?轉(zhuǎn)染，并降低抗-Luc siRNA的濃度。48小時(shí)后使用常規(guī)測定法測量螢光素酶的表達(dá)。對照siRNA未觀察到抑制作用。

用INTERFERin?轉(zhuǎn)染靶向內(nèi)源性層粘連蛋白A/C的1nM siRNA可將層粘連蛋白基因表達(dá)顯著降低至幾乎無法檢測的水平（圖3）。

圖3：用INTERFERin?轉(zhuǎn)染1nM siRNA導(dǎo)致有效和特異的基因沉默。使用INTERFERin?用1nM層粘連蛋白A/C siRNA轉(zhuǎn)染CaSki細(xì)胞。48小時(shí)后，通過免疫熒光顯微鏡測定層粘連蛋白A/C沉默效率。

二、適用于miRNA轉(zhuǎn)染

microRNA（miRNA）寡核苷酸的轉(zhuǎn)染正越來越多地用于分析特定miRNA對細(xì)胞功能的生物學(xué)影響。INTERFERin?是遞送miRNA、miRNA模擬物或前miRNA的首選試劑。

INTERFERin?是最新一代siRNA和miRNA轉(zhuǎn)染試劑，專為在多種細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)高轉(zhuǎn)染效率而設(shè)計(jì)，可實(shí)現(xiàn)高基因沉默或刺激基因表達(dá)。事實(shí)上，一些miRNA也已知通過與感興趣基因的啟動子結(jié)合來誘導(dǎo)基因表達(dá)。例如，INTERFERin?介導(dǎo)的miR-373遞送導(dǎo)致E-鈣粘蛋白表達(dá)增加3倍（圖4）。

圖4：用INTERFERin?轉(zhuǎn)染miR-373可增強(qiáng)E-鈣粘蛋白的表達(dá)。將PC-3細(xì)胞接種在6孔板中，并用miR-373（25 nM）轉(zhuǎn)染，每孔使用8μl的INTERFERin?。轉(zhuǎn)染后72小時(shí)，通過RT-qPCR測定E-鈣粘蛋白mRNA的表達(dá)水平。

INTERFERin?的陽離子組分只需要很少的寡核苷酸量，從而實(shí)現(xiàn)溫和的轉(zhuǎn)染過程。此外，簡單而穩(wěn)健的協(xié)議確保了可重復(fù)的結(jié)果。像miRNA這樣的寡核苷酸可以用少量的INTERFERin?轉(zhuǎn)染，從而導(dǎo)致強(qiáng)烈的基因沉默或刺激基因表達(dá)。無論使用何種濃度的INTERFERin?，效果都大致相同，使INTERFERin成為一種經(jīng)濟(jì)的試劑。例如，使用不同體積的INTERFERin?的折疊變化總是在1.5和1.8之間（圖5）。

圖5:INTERFERin?在非常低的量下已經(jīng)很有效。將PC-3細(xì)胞接種在6孔板中，并使用4、6或8μl/孔的INTERFERin?用miR-373（10nM）轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染后72小時(shí)，通過Western印跡分析E-鈣粘蛋白的表達(dá)。使用β-肌動蛋白表達(dá)對測定進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。以對照情況為參考表示量化。

與高細(xì)胞活力相關(guān)的高轉(zhuǎn)染效率使INTERFERin?成為為科學(xué)出版物生成相關(guān)數(shù)據(jù)的首選試劑。事實(shí)上，自推出以來，使用INTERFERin?研究miRNA和miRNA相關(guān)分子的出版物數(shù)量呈指數(shù)級增長（圖6）。

圖6:INTERFERin?參與了越來越多關(guān)于miRNA轉(zhuǎn)染的出版物。

三、超過90%的基因沉默

對于許多貼壁細(xì)胞系或原代細(xì)胞，1nM的siRNA足以獲得90%以上的基因沉默。對于懸浮細(xì)胞系，使用5nM siRNA的INTERFERin?仍然可以達(dá)到80%的沉默（表1）。

表1：使用INTERFERin?成功轉(zhuǎn)染細(xì)胞系和獲得的沉默效率。

四、卓越的細(xì)胞活力

在細(xì)胞活力方面，INTERFERin?優(yōu)于其他轉(zhuǎn)染試劑。用1nM siRNA轉(zhuǎn)染48小時(shí)后，用INTERFERin?轉(zhuǎn)染的細(xì)胞看起來是健康的，而用試劑S可以清楚地觀察到毒性（圖7）。

圖7:INTERFERin?對細(xì)胞極為溫和，如使用INTERFERin?或競爭試劑轉(zhuǎn)染siRNA 48小時(shí)后細(xì)胞形態(tài)的比較所示。根據(jù)制造商的方案，使用INTERFERin?或競爭對手S或H在血清存在下用1nM螢光素酶siRNA轉(zhuǎn)染A549-GL3Luc細(xì)胞。

五、簡單的Protocol

INTERFERin?可隨時(shí)使用，且協(xié)議簡單明了。1nM siRNA的起始濃度確保了大多數(shù)細(xì)胞類型中大多數(shù)基因的沉默（圖8）。

INTERFERin?與血清和抗生素都兼容，因此避免了任何耗時(shí)的洗滌和介質(zhì)更換；此外，INTERFERin?可以留在細(xì)胞上而沒有任何不良影響。INTERFERin?可隨時(shí)使用，且協(xié)議簡單明了。1nM siRNA的起始濃度確保了大多數(shù)細(xì)胞類型中大多數(shù)基因的沉默(圖8）。

INTERFERin?與血清和抗生素都兼容，因此避免了任何耗時(shí)的洗滌和介質(zhì)更換；此外，INTERFERin?可以留在細(xì)胞上而沒有任何不良影響。

圖 8: INTERFERin? Protocol

產(chǎn)品應(yīng)用：

Polyplus的INTERFERin?試劑非常適合進(jìn)行RNA干擾實(shí)驗(yàn)，該實(shí)驗(yàn)對應(yīng)于siRNA促進(jìn)的基因表達(dá)的特異性抑制。siRNA是存在于植物、蠕蟲和哺乳動物細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中的基因特異性互補(bǔ)雙鏈RNA寡核苷酸，可以用INTERFERin?有效地轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中.

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