<NBS2122> EZ poly?in vivo mRNA活體轉(zhuǎn)染試劑

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<NBS2122> EZ poly?in vivo mRNA活體轉(zhuǎn)染試劑

EZ poly?in vivo mRNA活體轉(zhuǎn)染試劑
貨號： NBS2122-0.5ml
NBS2122-1ml
品牌： NoninBio

價(jià)格：￥2200.00~3300.00

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NBS2122-0.5ml NBS2122-1ml

EZ poly?in vivo mRNA活體轉(zhuǎn)染試劑

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	包裝規(guī)格
NBS2122-0.5ml	EZ poly?in vivo mRNA活體轉(zhuǎn)染試劑	0.5ml
NBS2122-1ml	EZ poly?in vivo mRNA活體轉(zhuǎn)染試劑	1ml

NoninBio轉(zhuǎn) 染試劑對標(biāo)產(chǎn)品列表

品牌	NoninBio	Invitrogen	polyplus
DNA專用	EZ poly? DNA轉(zhuǎn)染試劑	Lipofectamine 2000 /1.5mL	jetOPTIMUS?/1.5mL
DNA和RNA通用	EZ poly? DNA/RNA 轉(zhuǎn)染試劑	Lipofectamine 3000 /1.5mL	jetPRIME?/1.5mL
RNA 專用	EZ poly? RNA 轉(zhuǎn)染試劑	Lipofectamine RNAiMAX /1.5mL	INTERFERin?/1mL
懸浮細(xì)胞專用	EZ poly? S轉(zhuǎn)染試劑		PEIpro?/1.5mL
mRNA 專用	EZ poly? mRNA 轉(zhuǎn)染試劑	Lipofectamine RNAiMAX /1.5mL	jetMESSENGER? /0.75mL
體內(nèi)專用	EZ poly? in vivo 體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑	Invivofectamine 3.0 /10 次	in vivo -jetRNA? /1mL

產(chǎn)品簡介:

EZ poly?in vivo mRNA活體轉(zhuǎn)染試劑是一款體內(nèi)專用型基因轉(zhuǎn)染試劑，可通過肌肉注射的方式將mRNA遞送傳送至體內(nèi)并在注射部位高效表達(dá)目的蛋白。與其它mRNA專用體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑相比，具有操作簡便、體內(nèi)毒性低、穩(wěn)定性好、體內(nèi)轉(zhuǎn)染效率及蛋白表達(dá)量高等優(yōu)點(diǎn)。

應(yīng)用范圍:

EZ poly?in vivo mRNA活體轉(zhuǎn)染試劑可被應(yīng)用于mRNA疫苗研發(fā)或基因治療等相關(guān)工作的研究中。可用于遞送熒光標(biāo)記的mRNA或具有特殊功能的mRNA，并在體內(nèi)高效表達(dá)?？蓾M足基礎(chǔ)科研、初期工藝開發(fā)及臨床前實(shí)驗(yàn)研究使用。

保存條件:

2-8℃保存一年

運(yùn)輸：

常溫運(yùn)輸

體內(nèi)轉(zhuǎn)染方法:

以體重20g小鼠，mRNA注射10μg為例，參考表1調(diào)整，步驟如下：

1	試劑準(zhǔn)備: 按照表1用量首先取30 μL EZ poly?in vivo mRNA活體轉(zhuǎn)染試劑放置于樣品管中
2	復(fù)合物制備: 取10μL的mRNA(濃度為1μg/μL)與轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行直接復(fù)合
3	室溫靜止20分鐘
4	補(bǔ)加葡萄糖注射液: 取80μL的葡萄糖注射液加入到上面復(fù)合物溶液中
5	通過肌肉注射的方式，注射于鼠體內(nèi)，6~24小時(shí)后檢測mRNA在鼠體內(nèi)的蓄積或表達(dá)

體內(nèi)轉(zhuǎn)染條件的優(yōu)化:

可通過改變mRNA的用量和濃度以及EZ poly?in vivo mRNA活體轉(zhuǎn)染試劑體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑濃度對體內(nèi)分布或蛋白表達(dá)情況進(jìn)行優(yōu)化。EZ poly?in vivo mRNA活體轉(zhuǎn)染試劑(μL): mRNA (μg)可以在4:1和2:1之間調(diào)整。根據(jù)鼠體重的不同，葡萄糖注射液的補(bǔ)加體積可以在推薦量±30μL之間調(diào)節(jié)。優(yōu)化方法參考表2。使用熒光標(biāo)記mRNA的活體分布實(shí)驗(yàn)，建議在注射后4-6小時(shí)開始檢測，熒光素酶標(biāo)記mRNA的活體分布實(shí)驗(yàn)，建議在注射后6小時(shí)開始檢測。

表1. 不同體重鼠的體內(nèi)用量推薦

鼠體重	葡萄糖注射液補(bǔ)加體積	葡萄糖注射液釋后終體積	mRNA推薦用量
鼠體重	葡萄糖注射液補(bǔ)加體積	葡萄糖注射液釋后終體積	試劑用量	mRNA
15g	88 μL	120 μL	24μL	8 μg
20g	80 μL	120 μL	30 μL	10 μg
25g	72 μL	120 μL	36 μL	12 μg
30g	60 μL	120 μL	45 μL	15 μg

表2. 體重20g鼠的優(yōu)化復(fù)合方式推薦

鼠體重	葡萄糖注射液補(bǔ)加體積	葡萄糖注射液釋后終體積	mRNA推薦用量
鼠體重	葡萄糖注射液補(bǔ)加體積	葡萄糖注射液釋后終體積	試劑用量	mRNA
20g	112 μL	120 μL	6 μL	2 μg
20g	100 μL	120 μL	15 μL	5 μg
20g	80 μL	120 μL	30 μL	10 μg
20g	40 μL	120 μL	60 μL	20 μg

一：轉(zhuǎn)染效率低

影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的因素有很多。首先，與所轉(zhuǎn)染細(xì)胞有關(guān)，有的細(xì)胞容易轉(zhuǎn)染，如HeLa、B16F10、293T等。有的細(xì)胞不易轉(zhuǎn)染，如4T1、NIH3T3、BMDC等。其次，與轉(zhuǎn)染試劑的用量及與DNA的比例有關(guān)，在最佳的轉(zhuǎn)染比例附近可以達(dá)到最佳的轉(zhuǎn)染效果。最后，沒有使用最適宜的細(xì)胞密度，應(yīng)根據(jù)各種轉(zhuǎn)染試劑的說明書中推薦的細(xì)胞密度進(jìn)行細(xì)胞接種，更有利于提高轉(zhuǎn)染效率。

二：轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定，不能重現(xiàn)

轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定一般與兩個(gè)因素緊密相關(guān)，一個(gè)是轉(zhuǎn)染試劑的穩(wěn)定性，另一個(gè)是基因的穩(wěn)定性。轉(zhuǎn)染試劑應(yīng)按照說明書建議的保存溫度及條件進(jìn)行保存。如使用脂質(zhì)體類的轉(zhuǎn)染試劑，則不建議反復(fù)凍融，會(huì)引起該轉(zhuǎn)染試劑結(jié)構(gòu)上的變化?；蛉缍虝r(shí)間內(nèi)連續(xù)使用，可放置于4℃保存。若超過10天不使用，建議置于-20℃或-80℃長期儲存以降低核酸的降解速度。

三：細(xì)胞毒性大

導(dǎo)致轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞毒性大的因素有很多，例如DNA的用量過大、轉(zhuǎn)染試劑的用量過大、轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞狀態(tài)較差以及培養(yǎng)基中抗生素的加入等。建議嚴(yán)格按照所選擇轉(zhuǎn)染試劑的說明書進(jìn)行操作，以避免細(xì)胞毒性大的問題。

四：沒有生成高效率的DNA轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物

沒有生成高效復(fù)合物的因素有很多。首先，可能是沒有選對合適的轉(zhuǎn)染試劑。挑選轉(zhuǎn)染試劑時(shí)應(yīng)考慮基因的種類及分子量等因素。其次，有的轉(zhuǎn)染試劑對血清的影響很大，應(yīng)在無血清情況下進(jìn)行轉(zhuǎn)染。使用諾寧生物的EZ poly? 系列轉(zhuǎn)染試劑無需考慮血清對轉(zhuǎn)染體系的影響，可在含血清培養(yǎng)基中進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

五：使用錯(cuò)誤的轉(zhuǎn)染操作步驟

無論使用哪一款基因轉(zhuǎn)染試劑，都應(yīng)嚴(yán)格按照該轉(zhuǎn)染試劑的說明書進(jìn)行操作，其中包括轉(zhuǎn)染試劑的用量、基因用量、最佳轉(zhuǎn)染比例、孵育時(shí)間、檢測時(shí)間等重要因素。

六：轉(zhuǎn)染試劑有時(shí)呈云霧狀渾濁

如發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染試劑出現(xiàn)云霧狀渾濁應(yīng)立即聯(lián)系客服人員?；蜣D(zhuǎn)染試劑一般都呈清澈透明狀態(tài)，呈云霧狀渾濁可能是由于轉(zhuǎn)染試劑發(fā)生了污染或儲存溫度太低，請務(wù)必按照試劑說明書要求的溫度進(jìn)行儲存。如出現(xiàn)此現(xiàn)象，建議溫浴10分鐘后，觀察是否澄清。

七：轉(zhuǎn)染復(fù)合物出現(xiàn)沉淀

當(dāng)轉(zhuǎn)染試劑和基因的用量都高于說明書用量，或復(fù)合物的孵育體系體積小于說明書建議時(shí)，由于體系中過量的電荷發(fā)生了聚集會(huì)導(dǎo)致體系中的復(fù)合物出現(xiàn)沉淀。建議要嚴(yán)格參考說明書的用量進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

八：siRNA轉(zhuǎn)染時(shí)，基因沉默效率不夠高

影響siRNA沉默效率的因素很多，如基因本身是否被環(huán)境中的RNA酶污染降解？或所使用的細(xì)胞是否為難轉(zhuǎn)染細(xì)胞？以及是否按照說明書建議的用量進(jìn)行了操作等。首先應(yīng)該選擇合適的siRNA基因轉(zhuǎn)染試劑，確保細(xì)胞密度在60-70%之間，并嚴(yán)格按照說明書建議的用量去使用操作。

九：DNA-siRNA共轉(zhuǎn)染時(shí)，基因沉默效率不夠高

當(dāng)細(xì)胞同時(shí)轉(zhuǎn)染DNA和siRNA時(shí)，建議使用分別轉(zhuǎn)染的方式進(jìn)行。即使用基因轉(zhuǎn)染試劑分別與DNA和siRNA進(jìn)行復(fù)合，再將兩個(gè)復(fù)合物體系分兩次分別加入到同一個(gè)裝有細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)孔中。因DNA和RNA的轉(zhuǎn)染機(jī)理不相同，如只想使用一種轉(zhuǎn)染試劑同時(shí)轉(zhuǎn)染兩種基因，建議一定要使用通用型基因轉(zhuǎn)染試劑，如EZ poly? 系列的DNA/RNA產(chǎn)品，即可以轉(zhuǎn)染DNA又可以轉(zhuǎn)染RNA。