<NBS0207> EZ poly?in vivo siRNA & DNA 活體轉(zhuǎn)染試劑

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<NBS0207> EZ poly?in vivo siRNA & DNA 活體轉(zhuǎn)染試劑

EZ poly?in vivo siRNA & DNA 活體轉(zhuǎn)染試劑
貨號(hào)：NBS0207-0.5ml
NBS0207-1ml
品牌：NoninBio

價(jià)格：￥900.00~1780.00

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NBS0207-0.5ml NBS0207-1ml

EZ poly?in vivo siRNA & DNA 活體轉(zhuǎn)染試劑

產(chǎn)品編號(hào)	產(chǎn)品名稱	包裝規(guī)格
NBS0207-0.5ml	EZ poly?in vivo siRNA & DNA 活體轉(zhuǎn)染試劑	0.5ml
NBS0207-1ml	EZ poly?in vivo siRNA & DNA 活體轉(zhuǎn)染試劑	1ml

NoninBio轉(zhuǎn) 染試劑對(duì)標(biāo)產(chǎn)品列表

品牌	NoninBio	Invitrogen	polyplus
DNA專用	EZ poly? DNA轉(zhuǎn)染試劑	Lipofectamine 2000 /1.5mL	jetOPTIMUS?/1.5mL
DNA和RNA通用	EZ poly? DNA/RNA 轉(zhuǎn)染試劑	Lipofectamine 3000 /1.5mL	jetPRIME?/1.5mL
RNA 專用	EZ poly? RNA 轉(zhuǎn)染試劑	Lipofectamine RNAiMAX /1.5mL	INTERFERin?/1mL
懸浮細(xì)胞專用	EZ poly? S轉(zhuǎn)染試劑		PEIpro?/1.5mL
mRNA 專用	EZ poly? mRNA 轉(zhuǎn)染試劑	Lipofectamine RNAiMAX /1.5mL	jetMESSENGER? /0.75mL
體內(nèi)專用	EZ poly? in vivo 體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑	Invivofectamine 3.0 /10 次	in vivo -jetRNA? /1mL

產(chǎn)品簡介:

EZ poly?in vivo siRNA & DNA 活體轉(zhuǎn)染試劑是一款專用于體內(nèi)的基因轉(zhuǎn)染試劑，可通過尾靜脈注射的方式將基因傳送至腫瘤部位。與其它體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑相比，具有操作簡便、體內(nèi)毒性低、穩(wěn)定性好、體內(nèi)循環(huán)時(shí)間長、靶向性好等優(yōu)點(diǎn)。

應(yīng)用范圍:

EZ poly?in vivo siRNA & DNA 活體轉(zhuǎn)染試劑可適用于眾多動(dòng)物腫瘤模型。可攜帶熒光標(biāo)記基因、治療基因等到達(dá)腫瘤部位，并在腫瘤部位蓄積和表達(dá)。特別適用于各種常規(guī)腫瘤模型如HeLa、B16F10、MCF-7、 MDA-MB-231和A549等，均可得到較高的轉(zhuǎn)染效率，且重復(fù)性好。

保存條件:

2-8℃保存一年

運(yùn)輸：

常溫運(yùn)輸

體內(nèi)轉(zhuǎn)染方法:

以體重為20g的荷瘤鼠為例，請(qǐng)參考表1的轉(zhuǎn)染規(guī)模調(diào)整，步驟如下:

1	試劑準(zhǔn)備: 按照表1用量首先取20μL EZ poly?in vivo siRNA & DNA 活體轉(zhuǎn)染試劑放置于樣品管中
2	復(fù)合物制備: 取20μL的質(zhì)粒DNA(DNA濃度為1μg/μL) 或siRNA(1.5nmol)與上述轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行復(fù)合
3	補(bǔ)加葡萄糖注射液: 取140μL的葡萄糖注射液加入到上述復(fù)合物溶液中
4	通過尾靜脈注射的方式，注射于鼠體內(nèi)，24~48小時(shí)后檢測基因在腫瘤部位的的蓄積或表達(dá)

*DNA濃度可自行調(diào)整，總量等于20μg即可

體內(nèi)轉(zhuǎn)染條件的優(yōu)化:

可通過改變腫瘤體積的大小、基因的用量和濃度以及EZ poly?in vivo siRNA & DNA 活體轉(zhuǎn)染試劑濃度對(duì)體內(nèi)轉(zhuǎn)染進(jìn)行優(yōu)化。保證腫瘤體積在50mm³~200mm³最佳，EZ poly?in vivo siRNA & DNA 活體轉(zhuǎn)染試劑(μL): DNA (μg)可以在2:1和0.5:1之間調(diào)整；EZ poly?in vivo siRNA & DNA 活體轉(zhuǎn)染試劑(μL): siRNA(nmol)可以在10:1和 20:1 之間調(diào)整。瘤內(nèi)基因蓄積建議在注射后24小時(shí)檢測，瘤內(nèi)基因表達(dá)建議在注射后48小時(shí)檢測。

表1. 不同體重鼠的體內(nèi)用量推薦

鼠體重	建議瘤體積	補(bǔ)加葡萄糖注射液后終體積	DNA推薦用量		siRNA推薦用量
鼠體重	建議瘤體積	補(bǔ)加葡萄糖注射液后終體積	試劑用量	DNA	試劑用量	siRNA
15g	100mm³	150 μL	15μL	15μg	15μL	1.2 nmol
20g	100mm³	200 μL	20μL	20μg	20μL	1.5 nmol
25g	100mm³	250 μL	25μL	25μg	25μL	2.0 nmol
30g	100mm³	300 μL	30μL	30μg	30μL	2.4 nmol

一：轉(zhuǎn)染效率低

影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的因素有很多。首先，與所轉(zhuǎn)染細(xì)胞有關(guān)，有的細(xì)胞容易轉(zhuǎn)染，如HeLa、B16F10、293T等。有的細(xì)胞不易轉(zhuǎn)染，如4T1、NIH3T3、BMDC等。其次，與轉(zhuǎn)染試劑的用量及與DNA的比例有關(guān)，在最佳的轉(zhuǎn)染比例附近可以達(dá)到最佳的轉(zhuǎn)染效果。最后，沒有使用最適宜的細(xì)胞密度，應(yīng)根據(jù)各種轉(zhuǎn)染試劑的說明書中推薦的細(xì)胞密度進(jìn)行細(xì)胞接種，更有利于提高轉(zhuǎn)染效率。

二：轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定，不能重現(xiàn)

轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定一般與兩個(gè)因素緊密相關(guān)，一個(gè)是轉(zhuǎn)染試劑的穩(wěn)定性，另一個(gè)是基因的穩(wěn)定性。轉(zhuǎn)染試劑應(yīng)按照說明書建議的保存溫度及條件進(jìn)行保存。如使用脂質(zhì)體類的轉(zhuǎn)染試劑，則不建議反復(fù)凍融，會(huì)引起該轉(zhuǎn)染試劑結(jié)構(gòu)上的變化。基因如短時(shí)間內(nèi)連續(xù)使用，可放置于4℃保存。若超過10天不使用，建議置于-20℃或-80℃長期儲(chǔ)存以降低核酸的降解速度。

三：細(xì)胞毒性大

導(dǎo)致轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞毒性大的因素有很多，例如DNA的用量過大、轉(zhuǎn)染試劑的用量過大、轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞狀態(tài)較差以及培養(yǎng)基中抗生素的加入等。建議嚴(yán)格按照所選擇轉(zhuǎn)染試劑的說明書進(jìn)行操作，以避免細(xì)胞毒性大的問題。

四：沒有生成高效率的DNA轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物

沒有生成高效復(fù)合物的因素有很多。首先，可能是沒有選對(duì)合適的轉(zhuǎn)染試劑。挑選轉(zhuǎn)染試劑時(shí)應(yīng)考慮基因的種類及分子量等因素。其次，有的轉(zhuǎn)染試劑對(duì)血清的影響很大，應(yīng)在無血清情況下進(jìn)行轉(zhuǎn)染。使用諾寧生物的EZ poly? 系列轉(zhuǎn)染試劑無需考慮血清對(duì)轉(zhuǎn)染體系的影響，可在含血清培養(yǎng)基中進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

五：使用錯(cuò)誤的轉(zhuǎn)染操作步驟

無論使用哪一款基因轉(zhuǎn)染試劑，都應(yīng)嚴(yán)格按照該轉(zhuǎn)染試劑的說明書進(jìn)行操作，其中包括轉(zhuǎn)染試劑的用量、基因用量、最佳轉(zhuǎn)染比例、孵育時(shí)間、檢測時(shí)間等重要因素。

六：轉(zhuǎn)染試劑有時(shí)呈云霧狀渾濁

如發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染試劑出現(xiàn)云霧狀渾濁應(yīng)立即聯(lián)系客服人員。基因轉(zhuǎn)染試劑一般都呈清澈透明狀態(tài)，呈云霧狀渾濁可能是由于轉(zhuǎn)染試劑發(fā)生了污染或儲(chǔ)存溫度太低，請(qǐng)務(wù)必按照試劑說明書要求的溫度進(jìn)行儲(chǔ)存。如出現(xiàn)此現(xiàn)象，建議溫浴10分鐘后，觀察是否澄清。

七：轉(zhuǎn)染復(fù)合物出現(xiàn)沉淀

當(dāng)轉(zhuǎn)染試劑和基因的用量都高于說明書用量，或復(fù)合物的孵育體系體積小于說明書建議時(shí)，由于體系中過量的電荷發(fā)生了聚集會(huì)導(dǎo)致體系中的復(fù)合物出現(xiàn)沉淀。建議要嚴(yán)格參考說明書的用量進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

八：siRNA轉(zhuǎn)染時(shí)，基因沉默效率不夠高

影響siRNA沉默效率的因素很多，如基因本身是否被環(huán)境中的RNA酶污染降解？或所使用的細(xì)胞是否為難轉(zhuǎn)染細(xì)胞？以及是否按照說明書建議的用量進(jìn)行了操作等。首先應(yīng)該選擇合適的siRNA基因轉(zhuǎn)染試劑，確保細(xì)胞密度在60-70%之間，并嚴(yán)格按照說明書建議的用量去使用操作。

九：DNA-siRNA共轉(zhuǎn)染時(shí)，基因沉默效率不夠高

當(dāng)細(xì)胞同時(shí)轉(zhuǎn)染DNA和siRNA時(shí)，建議使用分別轉(zhuǎn)染的方式進(jìn)行。即使用基因轉(zhuǎn)染試劑分別與DNA和siRNA進(jìn)行復(fù)合，再將兩個(gè)復(fù)合物體系分兩次分別加入到同一個(gè)裝有細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)孔中。因DNA和RNA的轉(zhuǎn)染機(jī)理不相同，如只想使用一種轉(zhuǎn)染試劑同時(shí)轉(zhuǎn)染兩種基因，建議一定要使用通用型基因轉(zhuǎn)染試劑，如EZ poly? 系列的DNA/RNA產(chǎn)品，即可以轉(zhuǎn)染DNA又可以轉(zhuǎn)染RNA。