<NBS2121> EZ poly?mRNA轉(zhuǎn)染試劑

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<NBS2121> EZ poly?mRNA轉(zhuǎn)染試劑

EZ poly?mRNA轉(zhuǎn)染試劑
貨號：NBS2121-0.5ml
NBS2121-1ml
品牌：NoninBio

價格：￥1300.00~2300.00

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NBS2121-0.5ml NBS2121-1ml

EZ poly?mRNA轉(zhuǎn)染試劑

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	包裝規(guī)格
NBS2121-0.5ml	EZ poly?mRNA轉(zhuǎn)染試劑	0.5ml
NBS2121-1ml	EZ poly?mRNA轉(zhuǎn)染試劑	1ml

NoninBio轉(zhuǎn) 染試劑對標產(chǎn)品列表

品牌	NoninBio	Invitrogen	polyplus
DNA專用	EZ poly? DNA轉(zhuǎn)染試劑	Lipofectamine 2000 /1.5mL	jetOPTIMUS?/1.5mL
DNA和RNA通用	EZ poly? DNA/RNA 轉(zhuǎn)染試劑	Lipofectamine 3000 /1.5mL	jetPRIME?/1.5mL
RNA 專用	EZ poly? RNA 轉(zhuǎn)染試劑	Lipofectamine RNAiMAX /1.5mL	INTERFERin?/1mL
懸浮細胞專用	EZ poly? S轉(zhuǎn)染試劑		PEIpro?/1.5mL
mRNA 專用	EZ poly? mRNA 轉(zhuǎn)染試劑	Lipofectamine RNAiMAX /1.5mL	jetMESSENGER? /0.75mL
體內(nèi)專用	EZ poly? in vivo 體內(nèi)轉(zhuǎn)染試劑	Invivofectamine 3.0 /10 次	in vivo -jetRNA? /1mL

產(chǎn)品簡介:

EZ poly?mRNA轉(zhuǎn)染試劑是一款高性能的mRNA專用轉(zhuǎn)染試劑，可用于mRNA在多種貼壁細胞中的傳送。可直接將mRNA傳遞到細胞質(zhì)中進行表達，避免了轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用及進入細胞核的限制。可被應(yīng)用在短期蛋白表達的相關(guān)研究工作中。

應(yīng)用范圍:

EZ poly?mRNA轉(zhuǎn)染試劑可適用于眾多貼壁或懸浮細胞株的mRNA轉(zhuǎn)染。在各種常規(guī)、難轉(zhuǎn)、原代細胞及干細胞中均可得到較高的轉(zhuǎn)染效率，且性能穩(wěn)定。與其它轉(zhuǎn)染試劑相比，具有不受血清影響、毒性低、穩(wěn)定性好、轉(zhuǎn)染簡單易行、重復(fù)性好等優(yōu)點。

保存條件:

2-8℃保存一年

運輸：

常溫運輸

mRNA的轉(zhuǎn)染:

以24孔板為例，請參考表1的轉(zhuǎn)染規(guī)模調(diào)整，步驟如下:

1	細胞接種: 每孔接種0 . 5 ~ 1 . 0 × 10⁵ 個細胞，細胞培養(yǎng) 12~24小時，使轉(zhuǎn)染時細胞密度達到60~70%融合度
2	mRNA稀釋: 將0.5μg的mRNA加入到Opti-MEM培養(yǎng)基中，稀釋后的終體積為10μL
3	轉(zhuǎn)染試劑稀釋: 取1μL的EZ poly?mRNA轉(zhuǎn)染試劑加入到9μL 的Opti-MEM培養(yǎng)基中，稀釋后的終體積為10μL
4	復(fù)合物制備：將上述mRNA稀釋液和轉(zhuǎn)染試劑稀釋液混合，輕輕吹打均勻后，室溫靜置10分鐘
5	將上述20μL復(fù)合物加入到24孔板中，輕輕吹打混勻，繼續(xù)培養(yǎng)18~48小時后檢測轉(zhuǎn)染效率，無需更換培養(yǎng)基

mRNA的轉(zhuǎn)染優(yōu)化:

可通過改變細胞密度、mRNA濃度以及EZ poly?mRNA轉(zhuǎn)染試劑濃度對轉(zhuǎn)染進行優(yōu)化。保證細胞融合度在60%以上，EZ poly?mRNA轉(zhuǎn)染試劑(μL): mRNA (μg)可以在1:1和5:1之間調(diào)整。轉(zhuǎn)染步驟與DNA相同，請參考表1的轉(zhuǎn)染規(guī)模進行調(diào)整，所有數(shù)量和體積均是按孔計算。轉(zhuǎn)染高密度細胞可獲得高轉(zhuǎn)染效率、高表達水平和低細胞毒性。

表1. 不同培養(yǎng)板所需轉(zhuǎn)染試劑和mRNA的用量

培養(yǎng)板	單孔面積	接種培養(yǎng)基	Opti-MEM培養(yǎng)基釋后終體積	mRNA轉(zhuǎn)染
培養(yǎng)板	單孔面積	接種培養(yǎng)基	Opti-MEM培養(yǎng)基釋后終體積	試劑用量	mRNA
96孔板	0.3cm²	200μL	10μL	0.4μL	0.2μg
24孔板	2.0cm²	500μL	20μL	1.0μL	0.5μg
12孔板	4.0cm²	1mL	40μL	2.0μL	1.0μg
6孔板	10.0cm²	2mL	100μL	4.0μL	2.0μg
60mm	20.0cm²	5mL	0.2mL	8.0μL	4.0μg
100mm	60.0cm²	15mL	0.6mL	24.0μL	12.0μg

一：轉(zhuǎn)染效率低

影響細胞轉(zhuǎn)染效率的因素有很多。首先，與所轉(zhuǎn)染細胞有關(guān)，有的細胞容易轉(zhuǎn)染，如HeLa、B16F10、293T等。有的細胞不易轉(zhuǎn)染，如4T1、NIH3T3、BMDC等。其次，與轉(zhuǎn)染試劑的用量及與DNA的比例有關(guān)，在最佳的轉(zhuǎn)染比例附近可以達到最佳的轉(zhuǎn)染效果。最后，沒有使用最適宜的細胞密度，應(yīng)根據(jù)各種轉(zhuǎn)染試劑的說明書中推薦的細胞密度進行細胞接種，更有利于提高轉(zhuǎn)染效率。

二：轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定，不能重現(xiàn)

轉(zhuǎn)染效果不穩(wěn)定一般與兩個因素緊密相關(guān)，一個是轉(zhuǎn)染試劑的穩(wěn)定性，另一個是基因的穩(wěn)定性。轉(zhuǎn)染試劑應(yīng)按照說明書建議的保存溫度及條件進行保存。如使用脂質(zhì)體類的轉(zhuǎn)染試劑，則不建議反復(fù)凍融，會引起該轉(zhuǎn)染試劑結(jié)構(gòu)上的變化。基因如短時間內(nèi)連續(xù)使用，可放置于4℃保存。若超過10天不使用，建議置于-20℃或-80℃長期儲存以降低核酸的降解速度。

三：細胞毒性大

導(dǎo)致轉(zhuǎn)染時細胞毒性大的因素有很多，例如DNA的用量過大、轉(zhuǎn)染試劑的用量過大、轉(zhuǎn)染時細胞狀態(tài)較差以及培養(yǎng)基中抗生素的加入等。建議嚴格按照所選擇轉(zhuǎn)染試劑的說明書進行操作，以避免細胞毒性大的問題。

四：沒有生成高效率的DNA轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物

沒有生成高效復(fù)合物的因素有很多。首先，可能是沒有選對合適的轉(zhuǎn)染試劑。挑選轉(zhuǎn)染試劑時應(yīng)考慮基因的種類及分子量等因素。其次，有的轉(zhuǎn)染試劑對血清的影響很大，應(yīng)在無血清情況下進行轉(zhuǎn)染。使用諾寧生物的EZ poly? 系列轉(zhuǎn)染試劑無需考慮血清對轉(zhuǎn)染體系的影響，可在含血清培養(yǎng)基中進行轉(zhuǎn)染。

五：使用錯誤的轉(zhuǎn)染操作步驟

無論使用哪一款基因轉(zhuǎn)染試劑，都應(yīng)嚴格按照該轉(zhuǎn)染試劑的說明書進行操作，其中包括轉(zhuǎn)染試劑的用量、基因用量、最佳轉(zhuǎn)染比例、孵育時間、檢測時間等重要因素。

六：轉(zhuǎn)染試劑有時呈云霧狀渾濁

如發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染試劑出現(xiàn)云霧狀渾濁應(yīng)立即聯(lián)系客服人員。基因轉(zhuǎn)染試劑一般都呈清澈透明狀態(tài)，呈云霧狀渾濁可能是由于轉(zhuǎn)染試劑發(fā)生了污染或儲存溫度太低，請務(wù)必按照試劑說明書要求的溫度進行儲存。如出現(xiàn)此現(xiàn)象，建議溫浴10分鐘后，觀察是否澄清。

七：轉(zhuǎn)染復(fù)合物出現(xiàn)沉淀

當轉(zhuǎn)染試劑和基因的用量都高于說明書用量，或復(fù)合物的孵育體系體積小于說明書建議時，由于體系中過量的電荷發(fā)生了聚集會導(dǎo)致體系中的復(fù)合物出現(xiàn)沉淀。建議要嚴格參考說明書的用量進行轉(zhuǎn)染。

八：siRNA轉(zhuǎn)染時，基因沉默效率不夠高

影響siRNA沉默效率的因素很多，如基因本身是否被環(huán)境中的RNA酶污染降解？或所使用的細胞是否為難轉(zhuǎn)染細胞？以及是否按照說明書建議的用量進行了操作等。首先應(yīng)該選擇合適的siRNA基因轉(zhuǎn)染試劑，確保細胞密度在60-70%之間，并嚴格按照說明書建議的用量去使用操作。

九：DNA-siRNA共轉(zhuǎn)染時，基因沉默效率不夠高

當細胞同時轉(zhuǎn)染DNA和siRNA時，建議使用分別轉(zhuǎn)染的方式進行。即使用基因轉(zhuǎn)染試劑分別與DNA和siRNA進行復(fù)合，再將兩個復(fù)合物體系分兩次分別加入到同一個裝有細胞的實驗孔中。因DNA和RNA的轉(zhuǎn)染機理不相同，如只想使用一種轉(zhuǎn)染試劑同時轉(zhuǎn)染兩種基因，建議一定要使用通用型基因轉(zhuǎn)染試劑，如EZ poly? 系列的DNA/RNA產(chǎn)品，即可以轉(zhuǎn)染DNA又可以轉(zhuǎn)染RNA。