外泌體熒光染料a(DiR)
產品編號 | 產品名稱 | 包裝規格 |
NW3201 | 外泌體熒光染料(DiR) | 200 μL(1mM) |
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產品簡介:
DiR是一種親脂性的近紅外熒光花青染料。其兩個18-碳鏈可以與細胞膜或親脂性生物分子結合,從而進行特定、穩定的染色。DiR所發射的紅外光可以高效地穿過細胞和組織,所以常用于活體成像和示蹤。
產品特性:
1. 分子式:C63 H101 IN2
2. 分子量:1013.4
3. 溶劑:DMSO
4. λex/λem(MeOH) = 748/780 nm
保存條件:
-20℃避光保存,1年有效。
產品使用:
一、 染料工作液制備
將“外泌體熒光標記染料(DiR)”用1×PBS稀釋10 倍,配制成濃度為100 μM的染料工作液。
二、 外泌體染色
1. 在外泌體懸液中加入染料工作液,建議染料終濃度為 10~20 μM(按照終體積的1/5~1/10加入100 μM的染 料工作液);
2. 加入染料工作液后將離心管蓋緊,通過渦旋振蕩器混勻 1 min,再放置于37℃孵育30 min;
3. 向孵育后的外泌體-染料復合物中加入10 mL的1×PBS 混勻;
4. 按照外泌體提取方法再次提取外泌體以去除游離染料;
5. 取200 μL 1×PBS重懸沉淀物,即為染色后的外泌體。
注意事項:
1. 熒光染料均存在淬滅問題,請注意避光,以減緩熒光淬滅。
2. 染料工作液應現配現用,不能提前配制,否則將影響染色效果。
3. DiR染色固定細胞或組織樣品時,樣品宜使用4%多聚甲醛進行固定,使用其它不適當的固定液會導致熒光背景較高。
4. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
常見問題:
1. 活體成像對外泌體濃度要求較高,建議用于染料標記的外泌體原始濃度達到0.5~1.5 μg/μL,外泌體濃度過低實驗失敗風險較高。
2. 外泌體染色步驟中去除游離染料的第3、4步必不可少,以避免游離染料對后期實驗的干擾。這一步相當于重新提取外泌體,所有外泌體提取純化方式都適用。
3. DiR碘化物(DiR染料)的發射波長肉眼不可見,需要使用配備CCD鏡頭或其他設備的近紅外檢測儀器,建議使用活體成像儀。
4. 建議染料標記的外泌體在注射后24 h內設置梯度時間 進行觀測,多數情況下,在注射后2~8 h熒光強度達到峰值。為保證觀察結果,小動物需要做剃毛處理。
5. 由于以下兩個原因,建議制備2倍于活體成像或示蹤實驗所需外泌體量以進行染料標記:1)外泌體染色效率難 以達到100%;2)在去游離染料過程中無法避免外泌體的損失。
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產品編號 | 產品名稱 | 包裝規格 |
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20μL(1mM) | ||
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25T |