內(nèi)質(zhì)網(wǎng)綠色熒光探針（活細(xì)胞成像用）

ER-Tracker Green (BODIPY FL Glibenclamide), for live-cell imaging

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產(chǎn)品簡介：

ER-Tracker探針是一系列具有細(xì)胞膜透過性，對活細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)具有高度選擇性的探針，不像傳統(tǒng)的DiOC6(3)，該系列探針幾乎不對線粒體著色，且在較低濃度即可實(shí)現(xiàn)對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的染色，且對細(xì)胞幾乎無毒性。使用以下提供的優(yōu)化步驟對活細(xì)胞染色后用醛固定，可以部分保留活細(xì)胞的染色特征。

本品為ER-Tracker Green (BODIPY FL Glibenclamide)，由綠色熒光染料BODIPY FL和 Glibenclamide 偶聯(lián)而成，其Ex= 504 nm，Em= 511nm。格列本脲（Glibenclamide, glyburide），一種常用降血糖藥物，在胰島β細(xì)胞、胰島素的分泌、心肌衰竭細(xì)胞功能以及心律不齊的研究等方面具有重要科研用途。格列本脲高度結(jié)合ATP-敏感型K⁺通道的磺脲受體，且本受體富集存在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上，因此適合用作內(nèi)質(zhì)網(wǎng)熒光探針。

本品為溶于DMSO的1 mM 濃度ER-Tracker Green (BODIPY FL Glibenclamide)儲存液，推薦工作濃度為～1 μM。我司還提供了ER-Tracker Green 稀釋液，使ER-Tracker Green的使用更加便捷。按照1:1000的比例稀釋，每10μl可以配制10ml ER-Tracker Green工作液；按照1:3000的比例稀釋，每10μl可以配制30ml ER-Tracker Green工作液。

保存條件: 

-20℃避光干燥保存，至少六個月有效，避免反復(fù)凍融。

基本特性：

1)     分子式（Formula）：C₃₇H₄₂BClF₂N₆O₆S

2)     分子量（Molecular Weight）：783.1

3)     Ex/Em：504/511 nm 

4)     濾片（Filter）：FITC

5)     外觀（Appearance）：液體

6)     溶解性：溶于DMSO（1mM）

7)     純度：1mM

8)     化學(xué)結(jié)構(gòu)圖：

產(chǎn)品組成：

產(chǎn)品使用：（以下步驟僅做參考，具體請根據(jù)實(shí)際情況或參考文獻(xiàn)資料來調(diào)整）

使用前，先將本品取出回溫至室溫，并對其進(jìn)行簡短離心使DMSO溶液集中于管底。最佳工作濃度需根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)要求、細(xì)胞類型、細(xì)胞或組織的膜通透性等進(jìn)行優(yōu)化。

1. ER-Tracker Green工作液的配制：
(1) 取少量ER-Tracker Green按照1:1000的比例加入到ER-Tracker Green 稀釋液中。例如取1μl ER-Tracker Green加入到1ml ER-Tracker Green 稀釋液中。混勻后即為ER-Tracker Green工作液。
(2) ER-Tracker Green工作液使用前需37℃預(yù)溫育。
[注]：工作液中ER-Tracker Green的濃度可以根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，推薦的稀釋比例調(diào)整范圍為1:1000-1:3000。為降低背景，在染色效果可以接受的范圍內(nèi)，建議盡量使用較低濃度的ER-Tracker Green。

2. 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的熒光標(biāo)記：

(1) 去除細(xì)胞培養(yǎng)液，用適量的溶液如Hanks平衡鹽溶液（HBSS），含碳酸氫鈉和鈣、鎂離子 ，不含酚紅（CAT# NBS4100）洗滌生長在蓋玻片上的細(xì)胞。

(2) 去除洗滌液，加入步驟1配制好的并37℃預(yù)溫育的ER-Tracker Green染色工作液，與細(xì)胞37℃共孵育15-30分鐘。
(3) 去除ER-Tracker Green染色工作液，用細(xì)胞培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞1-2次。
(4) 隨后通常用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡進(jìn)行觀察。此時可觀察到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)呈明亮的強(qiáng)熒光染色。
(5) 如果經(jīng)ER-Tracker Green染色后的細(xì)胞需要進(jìn)行固定，可以使用4%甲醛37℃固定2分鐘。固定后用適當(dāng)?shù)南礈煲合礈?span>2-3次，每次5分鐘，隨后可以進(jìn)行復(fù)染或滴加適當(dāng)?shù)目篃晒獯銣绶馄海詈蠓馄^察。

[注]：ER-Tracker Green染色的細(xì)胞不能用Triton X-100通透，Triton X-100通透處理會導(dǎo)致ER-Tracker Green的熒光染色消失。

注意事項(xiàng)：

1.      熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2.      為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅用于生命科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷及其他用途！

常見問題及解答FAQ：

Q: 請問HBSS 里面的鈣鎂離子在里面起到什么作用？

A: 有利于維持細(xì)胞狀態(tài)，利于后續(xù)的染色。

Q: 請問固定后的死細(xì)胞還能染上嗎？

A: 該探針主要染的是活細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，固定樣本基本染不上色。

Q: 染色之后可以加抗熒光淬滅劑防止熒光淬滅嗎？

A: 活細(xì)胞的染色，不需要加抗熒光淬滅封片液。

Q: 固定后的熒光還會淬滅么？或者說可以維持多長時間？

A: ER-Tracker Green 按照后附的使用說明染色后，用甲醛等固定后染色效果可以被部分保留， 熒光均會有淬滅的現(xiàn)象的。具體的熒光維持時間這邊沒有具體數(shù)據(jù)可參考。

Q: 請問 mito-tracker green 和 ER-traker red 是同時染還是分開依次染，染完后熒光可持續(xù)多久（也就是在多長時間內(nèi)還可以檢測）？

A: 建議分開依次染色，熒光均存在淬滅的現(xiàn)象，染色完建議盡快在1-2h內(nèi)完成檢測。

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