內質網藍色熒光探針（活細胞成像用）

ER-Tracker Blue-White DPX, for live-cell imaging 

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產品簡介：

ER-Tracker dyes是一系列細胞膜滲透性的活細胞染料，高度選擇性結合內質網（ER）。不同于傳統的內質網染料DiOC6(3)，該系列染料極少染色線粒體，且低濃度下染色無細胞毒性。使用提供的優化步驟對細胞染色和甲醛處理后，可以保留部分的活細胞染色特征。

ER-Tracker Blue-White DPX是Dapoxyl (DPX)染料家族的成員之一，這類染料具有長發射波長，高吸光系數，高量子產量和寬廣的斯托克頻移特征。這類染料屬于環境敏感型的探針，隨著溶劑極性的增加，最大熒光遷移到更長的波長，伴隨著光量子產量降低。

本品為DMSO儲存液，濃度為1mM。用于活細胞內質網染色，建議工作濃度為100nM-1μM，需根據實際情況做優化調整。

保存條件: 

-20℃避光干燥保存，至少六個月有效，避免反復凍融。

產品特性：

1）分子式：C₂₆H₂₁F₅N₄O₄S

2）分子量：580.5283

3）外觀：黃色液體

4）Ex/Em：374/430-640nm (in methanol)

5）檢測濾片：DAPI or UV longpass

6)    化學結構圖：

產品使用：

以下實驗方案是根據牛肺動脈內皮細胞（BPAE）優化所得，且已驗證適用于其他常規細胞系的染色。建議以下步驟僅作起始實驗的參考，請根據具體的細胞類型和實際情況來優化標記條件。

1. 試劑準備

ER-Tracker Blue-White DPX以1mM的DMSO儲存液形式提供，使用前請將ER-Tracker Blue-White DPX 從冰箱內取出，確保回溫至室溫后，經短暫離心將所有溶液沉到管底。

2. 細胞染色

(1) 制備染色工作液：

將1mM ER-Tracker Blue-White DPX稀釋至工作濃度，建議工作濃度100nM-1μM。為了最小化染料過高引起的假象，建議使用能達到實驗目的的最低濃度來完成染色。

【注意】：在Hanks平衡鹽溶液（HBSS），含碳酸氫鈉和鈣、鎂離子 ，不含酚紅（CAT# NBS4100）內進行染色可得到最佳結果。

(2) 細胞染色：

對于貼壁細胞，吸除培養基，用HBSS清洗細胞，加入預熱的染料工作液，37℃孵育15-30min。吸除染色液，加入不含探針的新鮮培養基，并在熒光顯微鏡下觀察細胞。如果細胞需要固定，請跳轉到步驟3。

3. 細胞固定及透化

(1) 固定和透化細胞：

用4%甲醛于37℃固定細胞10-20min。ER-Tracker Blue-White DPX染色信號在甲醛固定后僅能部分保留下來。如果還需要做其他染色，細胞需用0.2% TritonX-100 透化處理10min。

(2) 清洗和觀察細胞：

細胞固定后，用合適緩沖液清洗2次，每次5min。之后熒光顯微鏡下觀察。

注意事項：

1.      熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

2.      由于ER-Tracker Blue-White DPX是環境敏感型探針，會產生波動較大的發射吸收峰，在430-640nm之間出現。長通DAPI濾光片觀察效果最理想。

3.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

本產品僅用于生命科學研究，不得用于醫學診斷及其他用途！

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