外泌體提取純化試劑盒（細(xì)胞上清）

【溫馨提示】：見我司整理的專注外泌體研究，外泌體提取專家，專注外泌體提取試劑盒產(chǎn)品專題。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

外泌體是由細(xì)胞分泌的包含RNA和蛋白質(zhì)的小囊泡（30-150 nm），在血液、唾液、尿液及乳汁等體液中大量存在。外泌體被認(rèn)為具有細(xì)胞間信使的功能，在特定細(xì)胞之間傳遞它們的效應(yīng)物或信號(hào)分子；然而其構(gòu)造、效應(yīng)物組成以及所參與的生物學(xué)通路目前尚不明晰。

外泌體的生物學(xué)功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒，而傳統(tǒng)超速離心方法步驟繁瑣、硬件要求高、操作難度大。由本公司自主開發(fā)的外泌體提取純化試劑盒，組分經(jīng)過優(yōu)化處理，適用于細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的外泌體提取，并搭配純化過濾裝置，可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒，可用于電鏡分析、NTA 粒徑分析、核酸分析、蛋白分析、細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等。

保存條件: 

室溫保存，2年有效。

產(chǎn)品組成：

* Nuclease-free, Sterile

自備材料：

高速離心機(jī)，渦旋振蕩器，50 mL離心管，1.5 mL離心管，1×PBS緩沖液（無(wú)菌）。

產(chǎn)品使用：

一、 樣品預(yù)處理

1.      取樣：如果是凍存樣品，從冰箱取出后于25℃水浴中進(jìn)行解凍，將完全融化后的樣品置于冰上，如果是新鮮樣品，收集樣品后置于冰上；

2.      樣品初始用量：?jiǎn)未翁崛r(shí)的樣品量建議細(xì)胞培養(yǎng)上清液不低于20 mL；

3.      離心去細(xì)胞碎片：將樣品轉(zhuǎn)移至離心管中，于4℃以3,000×g（~5,200 rpm**）離心10min，去除樣品中的細(xì)胞碎片（注：若沉淀較多，可3,000 ×g，10 min 離心多次至無(wú)明顯沉淀，每次取離心上清液）；

**為約10 cm有效離心半徑的大離心機(jī)換算（≥15 mL離心管），下同。

4.      離心去雜質(zhì)碎片：將離心上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中，于4℃以10,000 ×g（~9,500 rpm**）離心10 min，去除樣品中的雜質(zhì)碎片；

5.      上清液轉(zhuǎn)移：去除雜質(zhì)碎片的上清液轉(zhuǎn)移到新離心管中。

二、 提取外泌體

1.      上清液預(yù)處理：在去除雜質(zhì)的離心上清液中加入 Exosome Concentration Solution（ECS 試劑），具體的加入劑量如下（其他劑量請(qǐng)根據(jù)表中的用量等比例換算）：

2.      溶液混合：加入ECS 試劑后將離心管蓋緊，通過渦旋 振蕩器混勻1 min，再放置于4℃靜置８h以上（注：增加靜置時(shí)間可提高外泌體得率，但不可超過24 h）；

3.      沉淀外泌體：取出裝有混合液的離心管于4℃以10,000 ×g（~9,500 rpm**）離心60 min，棄上清，沉淀中富含外泌體顆粒（注：盡可能吸盡上清液）；

4.      再次離心：將含有沉淀的離心管再次于 4℃以 10,000 ×g（~9,500 rpm**）離心2 min，棄上清（注：盡可能吸盡上清液）；

5.      外泌體重懸：取合適量的1×PBS均勻吹打離心沉淀物，待其溶解后，將重懸液轉(zhuǎn)移至新的1.5 mL離心管中（建議每20 mL細(xì)胞培養(yǎng)上清用200 μL左右1×PBS重懸）；

6.      收獲外泌體顆粒：將含有重懸液的1.5 mL離心管于4℃ 以12,000 ×g（~12,400 rpm*）離心2 min，保留上清液，其中富含外泌體顆粒（注：若沉淀較多，可12,000 ×g，2 min離心多次至無(wú)明顯沉淀，每次取上清液）。

*為約7 cm有效離心半徑的小離心機(jī)換算（≤2 mL離心管），下同。

三、 純化外泌體

1.      純化外泌體：將收獲的外泌體顆粒粗品轉(zhuǎn)入 Exosome Purification Filter（EPF 柱）上室中，于 4℃以 3,000 ×g（~6,200 rpm*）離心 10 min，離心后收集 EPF柱管底的液體，此液體即為純化后的外泌體顆粒（注：EPF 柱不可重復(fù)使用）；

2.      外泌體的保存：純化后的外泌體以合適體積進(jìn)行分裝凍存于-80℃低溫冰箱中，以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

注意事項(xiàng)：

1.      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

本產(chǎn)品僅用于生命科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷及其他用途！

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