ApeKI

產品簡介：

ApeKI來源于超嗜熱需氧古生菌(Aeropyrum pernix) K1，屬于Type IIP型限制酶，識別并切割G/CWGC序列，形成3堿基突出的粘性末端。ApeKI是基因組簡化測序（genotyping-by-sequencing，GBS）的首選酶之一，此外，還廣泛應用于動植物遺傳研究、群體進化分析及功能基因定位等領域。

識別位點：

GCWGC
5'...G↓C W G C...3'
3'...C G W C↑G ...5'

同裂酶：TseI

注：同裂酶對于不同的甲基化修飾可能具有不同敏感性。

產品組成：

保存條件: 

-20℃保存，2年有效。

建議反應條件:

1× Cut Buffer C；
75℃溫育；
參照“DNA 酶切流程”配制反應體系。

失活條件:

不可熱失活，請使用酚氯仿抽提或柱純化。

甲基化敏感性:

對于被 CpG 甲基化的 DNA，剪切可能受阻。

活性定義:

1 活性單位 (U) 是指在 50 μl 反應體系中，75℃ 1 h內完全酶切 1 μg λDNA 所需的酶量。

功能活性檢測：

75℃下，10 U ApeKI能夠在15 min內完全消化1 μg λDNA。

超長時間溫育檢測:

75℃下，將10 U ApeKI與1 μg λDNA共同溫育3 h，未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解。延時酶切可能出現星號活性。

酶切-連接-再酶切檢測:

75 ℃下，使用10 U ApeKI消化底物，回收酶切產物。在22℃下使用適量 T4 DNA Ligase (Fast)可以將酶切產物重新連接。將連接產物再次回收后，使用相同的內切酶可以重新切開連接產物。

使用方法：

1. DNA酶切流程

① 在冰上按如下建議的加樣順序配制反應體系：

a. DNA 底物中應不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗滌劑或高濃度鹽，否則將會影響ApeKI酶活性；

② 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時離心以收集掛壁液滴；

③ 75℃溫育15 min~3 h；

④ 酚氯仿抽提或柱純化（可選）。

不同DNA中的酶切位點數量

甲基化修飾影響

在不同反應緩沖液中的活性

注：活性數據來自限制酶標準反應體系下的檢測。

注意事項：

1.      反應體系中加入的酶體積不應超過總體積的10%，避免酶中過多的甘油引起星號活性；

2.      限制性內切酶存儲緩沖液中的添加劑（例如甘油、鹽）與底物溶液中的污染物（例如鹽、EDTA或乙醇等）相同，反應體積越小，酶切反應抑制效應越強。

3.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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