SgrAI

產品簡介：

SgrAI來源于灰色鏈霉菌（Streptomyces griseus），經大腸桿菌重組表達后純化獲得，特異性識別并切割CR/CCGGYG序列。SgrAI屬于非FastCut?系列限制酶，但可兼容CutOne?緩沖液，可用于和其他FastCut?系列限制酶進行雙酶切。基于酶的特殊性，SgrAI需要兩個及以上的酶切位點才能實現高效切割，對單位點的底物切割效率顯著下降。

識別位點：

CRCCGGYG
5'...C R ↓ C C G G Y G...3'
3'...G Y G G C C ↑ R C...5'

產品組成：

保存條件: 

-20℃保存，2年有效。

建議反應條件：

1× Cut Buffer B；

37℃溫育；
參照“DNA 酶切流程”配制反應體系。

失活條件：

80℃溫育20 min。

甲基化敏感性:

對于被 CpG 甲基化的 DNA，剪切可能受阻。

對于被 EcoKI 甲基化的 DNA，剪切可能受阻。

對于被 EcoBI 甲基化的 DNA，剪切可能受阻。

活性定義:

1活性單位 (U) 是指在激活劑存在下，50 μl反應體系中，37℃ 1 h 內完全酶切1 μg λDNA 所需的酶量。

功能活性檢測：

37℃下，10 U SgrAI能夠在15 min內完全消化1 μg λDNA。

超長時間溫育檢測：

37℃下，將10 U SgrAI與1 μg λDNA共同溫育3 h，未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解。延時酶切可能出現星號活性。

酶切-連接-再酶切檢測：

37℃下，使用10 U SgrAI消化底物，回收酶切產物。在22℃下使用適量 T4 DNA Ligase (Fast)可以將酶切產物重新連接。將連接產物再次回收后，使用相同的內切酶可以重新切開連接產物。

使用方法：

1. DNA酶切流程

① 在冰上按如下建議的加樣順序配制反應體系：

a. DNA 底物中應不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗滌劑或高濃度鹽，否則將會影響SgrAI酶活性；

② 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時離心以收集掛壁液滴；

③ 37℃溫育15 min~1 h；

④ 80℃溫育20 min即可使酶失活，停止反應，或者通過吸附柱或苯酚/氯仿純化終止反應。

不同DNA中的酶切位點數量

甲基化修飾影響

在不同反應緩沖液中的活性

注：活性數據來自限制酶標準反應體系下的檢測。

注意事項：

1.      酶切需要兩個或兩個以上識別位點。

2.      每μg DNA底物使用的酶量不建議超過10 U。

3.      因為反應中酶的穩定性，即使溫育時間超過1 h也不會提高酶切效率，除非增加酶量。

4.      延長酶切時間、高濃度酶或>5%的甘油濃度可能產生星號活性，尤其不建議過夜酶切。

5.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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