SspDI (KasI)

產品簡介：

SspDl屬于常規限制酶系列，可識別G^GCGCC序列。不同于雷霆系列快速內切酶，SspDl需要較長時間酶切以實現 DNA 底物的完全切割，但該酶仍使用雷霆限制酶通用反應緩沖液 CutOne? Buffer，可實現雙酶切。

識別位點：

GGCGCC
5'...G ↓ G C G C C...3'
3'...C C G C G ↑ G...5'

同裂酶：KasI

異裂酶：DinI, EgeI, EheI, Mly113I, NarI, PluTI, SfoI

注：同裂酶對于不同的甲基化修飾可能具有不同敏感性。

產品組成：

保存條件: 

-20℃保存，2年有效。

建議反應條件：

1× CutOne? 緩沖液；

37℃溫育；

參照“DNA酶切流程”配制反應體系。

失活條件：

80℃溫育20 min。

甲基化敏感性:

對于被 CpG 甲基化的 DNA，剪切可能受阻。

活性定義:

1 活性單位 (U) 是指在 50 μl 反應體系中，37℃ 1 h內完全酶切 1 μg pBR322所需的酶量。

超長時間溫育檢測：

最適反應溫度下，將10 U SspDI與1 μg pBR322共同溫育16 h，未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解。

酶切-連接-再酶切檢測：

最適反應溫度下，使用10 U SspDI消化底物，回收酶切產物。在22℃下使用適量 T4 DNA Ligase (Fast)可以將酶切產物重新連接。將連接產物再次回收后，使用相同的內切酶可以重新切開連接產物。

使用方法：

1. DNA酶切流程

① 在冰上按如下建議的加樣順序配制反應體系：

a. DNA 底物中應不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗滌劑或高濃度鹽，否則將會影響SspDI酶活性；

② 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時離心以收集掛壁液滴；

③ 37℃溫育1~16 h；

④ 80℃溫育20 min即可使酶失活，停止反應，或者通過吸附柱或苯酚/氯仿純化終止反應。

不同DNA中的酶切位點數量

甲基化修飾影響

在不同反應緩沖液中的活性

注：活性數據來自限制酶標準反應體系下的檢測。

注意事項：

1.      反應體系中加入的酶體積不應超過總體積的10%，避免酶中過多的甘油引起星號活性；

2.      限制性內切酶存儲緩沖液中的添加劑（例如甘油、鹽）與底物溶液中的污染物（例如鹽、EDTA或乙醇等）相同，反應體積越小，酶切反應抑制效應越強;

3.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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