Sgel

產品簡介：

SgeI可切割在單鏈或雙鏈 DNA 上含有5-甲基胞嘧啶的 DNA 靶標。SgeI 限制性內切酶可識別 ??CNNG(9/13)^ 位點，并于37°C下在其獨特的緩沖液中的切割效果最佳。為確保一致的性能，該酶Storage Buffer中包含預混合 BSA，其可增強酶的穩定性，并與 DNA 制劑中可能存在的污染物相結合。

識別位點：

??CNNG(9/13)
5'...?? C N N G(N)? ↓...3'
3'... G N N C(N)?? ↑...5'*
*SgeI 可識別與切割含有5-mC位點的DNA靶標序列，一條鏈或雙鏈甲基化均可被識別。

產品組成：

保存條件: 

-20℃保存，2年有效。

建議反應條件：

1× Sgel緩沖液；
37℃溫育；
參照“DNA 酶切流程”配制反應體系。

失活條件：

80℃溫育20 min。

甲基化敏感性:

對于被 CpG 甲基化的 DNA，剪切可能受阻。

活性定義:

在1× SgeI Buffer條件下，1 μg pUC19-SgeI DNA (Dcm+)在50 μl反應體系中37℃孵育1 h，不斷增加酶量，直至酶切產物 DNA帶 型不隨著酶量的增加而發生變化，此時酶量定義為 1 U。

核酸內切酶殘留檢測：

將3 U Sgel與超螺旋質粒DNA 在37℃溫育4 h，通過DNA電泳檢測質粒無變化。

功能活性檢測：

37℃下，5 U AarI能夠在1 h 內完全消化1 μg p615 DNA。

核酸外切酶殘留檢測：

將5 U Sgel與雙鏈DNA 底物在37℃溫育1 h，通過DNA電泳檢測雙鏈DNA底物無變化。

使用方法：

1. DNA酶切流程

① 在冰上按如下建議的加樣順序配制反應體系：

注：反應體系可以按比例放大或縮小。反應時間不建議超過1 h。

② 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時離心以收集掛壁液滴；

③ 37℃溫育1 h；

④ 80℃溫育20 min即可使酶失活，停止反應（可選）。

甲基化修飾影響

注意事項：

1.      底物至少需要2個SgeI識別序列才能有效酶切。

2.      甲基化DNA完全酶切取決于SgeI的識別位點的數量，另外由于識別位點酶切產生的DNA產物會促進SgeI的非特異性酶切，因此建議酶切時優化SgeI酶量用于酶切反應。

3.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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