BsrDI

產(chǎn)品簡介：

BsrDI來源于Bacillus stearothermophilus D70，由大小兩個亞基組成，屬于異二聚體酶。BsrDI識別特定序列GCAATG/CATTGC，切割頂鏈時在識別位點下游2個核苷酸處，底鏈則在識別位點后直接切割，產(chǎn)生特定的黏性末端，屬于Type IIS 型限制酶，可用于Golden gate組裝。

識別位點：

GCAATGNN
5'...G C A A T G N N ↓...3'
3'...C G T T A C↑N N ...5'

同裂酶：Bse3DI, BseMI

注：同裂酶對于不同的甲基化修飾可能具有不同敏感性。

產(chǎn)品組成：

保存條件: 

-20℃保存，2年有效。

建議反應(yīng)條件：

1× Cut Buffer B；
37℃溫育；
參照“DNA 酶切流程”配制反應(yīng)體系。

失活條件：

80℃溫育20 min。

甲基化敏感性:

對于被 EcoBI 甲基化的 DNA，剪切可能受阻。

活性定義:

1活性單位 (U) 是指在激活劑存在下，50 μl反應(yīng)體系中，37℃ 1 h 內(nèi)完全酶切1 μg λDNA 所需的酶量。

功能活性檢測：

37℃下，10 U BsrDI能夠在15 min內(nèi)完全消化1 μg λDNA。

超長時間溫育檢測：

37℃下，將10 U BsrDI與1 μg λDNA共同溫育3 h，未檢測到其他核酸酶污染或星號活性引起的底物非特異性降解。延時酶切可能出現(xiàn)星號活性。

酶切-連接-再酶切檢測：

37℃下，使用10 U BsrDI消化底物，回收酶切產(chǎn)物。在22℃下使用適量 T4 DNA Ligase (Fast)可以將酶切產(chǎn)物重新連接。將連接產(chǎn)物再次回收后，使用相同的內(nèi)切酶可以重新切開連接產(chǎn)物。

使用方法：

1. DNA酶切流程

① 在冰上按如下建議的加樣順序配制反應(yīng)體系：

a. DNA 底物中應(yīng)不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗滌劑或高濃度鹽，否則將會影響BsrDI酶活性；

② 輕柔吸打或輕彈管壁以混勻（切勿渦旋），然后瞬時離心以收集掛壁液滴；

③ 37℃溫育15 min~1 h；

④ 80℃溫育20 min即可使酶失活，停止反應(yīng)，或者通過吸附柱或苯酚/氯仿純化終止反應(yīng)。

不同DNA中的酶切位點數(shù)量

甲基化修飾影響

在不同反應(yīng)緩沖液中的活性

注：活性數(shù)據(jù)來自限制酶標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系下的檢測。

注意事項：

1.      反應(yīng)體系中加入的酶體積不應(yīng)超過總體積的10%，避免酶中過多的甘油引起星號活性；

2.      限制性內(nèi)切酶存儲緩沖液中的添加劑(例如甘油、鹽)與底物溶液中的污染物(例如鹽、EDTA或乙醇等)相同，反應(yīng)體積越小，酶切反應(yīng)抑制效應(yīng)越強。

3.      BsrDI可在CutOne Buffer中使用，但星號活性明顯強于在Cut Buffer B中反應(yīng)。若要使用Cutone Buffer進(jìn)行反應(yīng)，不建議酶切時間超過3 h或者超過 2 U的 BsrDI/μg DNA 底物。

4.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

相關(guān)常規(guī)限制性內(nèi)切酶產(chǎn)品：