NADPH氧化酶(NAO)活性檢測試劑盒 分光法

產(chǎn)品簡介：

NADPH氧化酶（NAO）是一個(gè)典型的膜蛋白，催化NADPH氧化生成NADP+，并將電子傳遞給氧原子從而產(chǎn)生超氧陰離子。廣泛存在于動物、植物和真菌中。該酶異?？蓪?dǎo)致人慢性肉芽腫病（GCD），在 植物中，該酶與其抗病性和各種脅迫有密切關(guān)系。

NADPH氧化酶（NAO）將NADPH氧化為NADP+的同時(shí)生成超氧陰離子(O2.-)，接著與顯色劑反應(yīng)生成水溶性的黃色物質(zhì)。對照通過添加該酶的特異性抑制劑DPI排除背景值。最終檢測生成的有色物質(zhì)在 450nm 處的吸光值，即可計(jì)算得出NAO酶活性大小。

保存條件: 

-20℃保存，六個(gè)月有效。

產(chǎn)品組成：

產(chǎn)品使用：

建議正式實(shí)驗(yàn)前，選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測定，了解實(shí)驗(yàn)樣品情況，熟悉流程，避免樣本和試劑浪費(fèi)！

一、樣本準(zhǔn)備：

(a) 組織樣本：取約0.1g組織，加入1mL提取液，在4oC或冰浴進(jìn)行勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測液；

【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例進(jìn)行提取。 (b) 細(xì)菌/細(xì)胞樣本：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；12000rpm4℃離 心10min，取上清，置冰上待測。

【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（10⁴）：提取液（mL）為500~1000：1的比例進(jìn)行提取。

(c) 液體樣品：直接檢測；若渾濁，離心后取上清檢測。

二、上機(jī)檢測：

(a) 可見分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，設(shè)定溫度37℃，調(diào)節(jié)波長至450nm，蒸餾水調(diào)零。 (b) 所有試劑解凍至室溫（25℃）。

(c) 在1mL玻璃比色皿中依次加入：

【注】若ΔA的值在零附近，可以延長反應(yīng)時(shí)間T（如至40min或更長），則改變后的反應(yīng)時(shí)間T需代入公式重新計(jì)算。

三、含量計(jì)算:

1、按樣本蛋白濃度計(jì)算：

酶活定義：每毫克組織蛋白每分鐘在反應(yīng)體系中使450nm處吸光值變化0.005為一酶活單位。

NAO(ΔOD₄₅₀/min/mg prot)=ΔA÷(V1×Cpr)÷0.005÷T=250×ΔA÷Cpr

2、按樣本鮮重計(jì)算：

酶活定義：每克組織每分鐘在反應(yīng)體系中使450nm處吸光值變化0.005為一酶活單位。

NAO(ΔOD₄₅₀/min/g 鮮重)=ΔA÷(W×V1÷V)÷0.005÷T=250×ΔA÷W

3、按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：

酶活定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘在反應(yīng)體系中使450nm處吸光值變化0.005為一酶活單位。

NAO(ΔOD₄₅₀/min /10⁴ cell)=ΔA÷(500×V1÷V)÷0.005÷T=5×ΔA

V---加入提取液體積，1mL

V1---加入樣本體積，0.04mL

T---反應(yīng)時(shí)間，20min

W---樣本質(zhì)量，g

500---細(xì)胞或細(xì)菌，萬

D---稀釋倍數(shù)，未稀釋即為1

Cpr---樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL

注意事項(xiàng)：

1.      為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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