NADPH氧化酶(NAO)活性檢測試劑盒 微板法

產品簡介：

NADPH氧化酶（NAO）是一個典型的膜蛋白，催化NADPH氧化生成NADP+，并將電子傳遞給氧原 子從而產生超氧陰離子。廣泛存在于動物、植物和真菌中。該酶異常可導致人慢性肉芽腫病（GCD），在植物中，該酶與其抗病性和各種脅迫有密切關系。

NADPH氧化酶（NAO）將NADPH氧化為NADP+的同時生成超氧陰離子(O2.-)，接著與顯色劑反應 生成水溶性的黃色物質。對照通過添加該酶的特異性抑制劑DPI排除背景值。最終檢測生成的有色物質在 450nm 處的吸光值，即可計算得出NAO酶活性大小。

保存條件: 

-20℃保存，六個月有效。

產品組成：

產品使用：

建議正式實驗前，選取 2 個樣本做預測定，了解實驗樣品情況，熟悉流程，避免樣本和試劑浪費！

一、樣本準備：

(a) 組織樣本：取約0.1g組織，加入1mL提取液，在4oC或冰浴進行勻漿(或使用各類常見勻漿器)。 4oC×12000rpm 離心10min，取上清作為待測液；

【注】：若增加樣本量，可按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例進行提取。 (b) 細菌/細胞樣本：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；取約500萬細菌或細胞加入1mL 提取液，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；12000rpm 4℃離 心10min，取上清，置冰上待測。

【注】：若增加樣本量，可按照細菌/細胞數量（10⁴）：提取液（mL）為500~1000：1的比例進行提取。

(c) 液體樣品：直接檢測；若渾濁，離心后取上清檢測。

二、上機檢測：

(a) 酶標儀預熱30min以上，設定溫度37℃，調節波長至450nm。

(b) 所有試劑解凍至室溫（25℃）。

(c) 在96孔板中依次加入：

【注】若ΔA的值在零附近，可以延長反應時間T（如至40min或更長），則改變后的反應時間T需代入公式重新計算。

三、含量計算:

1、按樣本蛋白濃度計算：

酶活定義：每毫克組織蛋白每分鐘在反應體系中使450nm處吸光值變化0.01為一酶活單位。

NAO(ΔOD₄₅₀/min/mg prot)=ΔA÷(V1×Cpr)÷0.01÷T=250×ΔA÷Cpr

2、按樣本鮮重計算：

酶活定義：每克組織每分鐘在反應體系中使450nm處吸光值變化0.01為一酶活單位。

NAO(ΔOD₄₅₀/min/g 鮮重)=ΔA÷(W×V1÷V)÷0.01÷T=250×ΔA÷W

3、按細菌或細胞密度計算：

酶活定義：每1萬個細菌或細胞每分鐘在反應體系中使450nm處吸光值變化0.01為一酶活單位。

NAO(ΔOD₄₅₀/min /10⁴ cell)=ΔA÷(500×V1÷V)÷0.01÷T=0.5×ΔA

V---加入提取液體積，1mL

V1---加入樣本體積，0.02mL

T---反應時間，20min

W---樣本質量，g

500---細胞或細菌，萬

D---稀釋倍數，未稀釋即為1

Cpr---樣本蛋白質濃度，mg/mL

注意事項：

1.      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

相關產品：